Troponin I-C Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423459

Descripción general

Tnni3 codifica la isoforma cardíaca de troponina I, que forma un complejo regulador con la troponina T y la troponina C en el filamento delgado para controlar la interacción actina–miosina durante el acoplamiento excitación–contracción. Mediante la modulación dependiente de Ca²⁺ de la actividad ATPasa de la miosina, la troponina I ayuda a ajustar la contractilidad y la relajación del sarcómero, integrando señales como la fosforilación mediada por quinasas, que altera la sensibilidad al Ca²⁺ de los miofilamentos. En cardiomiocitos de ratón, Tnni3 es esencial para la organización del sarcómero y los procesos de manejo del calcio que sustentan el gasto cardíaco. La alteración de la función o la regulación de la troponina I se estudia con frecuencia en el contexto de los mecanismos de cardiomiopatía, la disfunción contráctil y los fenotipos de remodelado inducido por estrés.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Troponin I-C (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Tnni3 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Tnni3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Tnni3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Troponin I-C.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Tnni3 para la investigación de la señalización de Troponin I-C, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Tnni3 críticos para la función de Troponin I-C
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Tnni3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Troponin I-C CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Troponin I-C CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Tnni3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Troponin I-C (m) y el plásmido HDR Troponin I-C (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Tnni3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Tnni3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.