Troponin C CRISPR Activationプラスミド (h): sc-406429-ACT

TNNC1は、心筋／遅筋型骨格筋トロポニンCをコードするCa2+結合性のEFハンドタンパク質であり、薄フィラメントのトロポニン複合体におけるカルシウムセンサーとして機能して、アクチン‐ミオシン相互作用とサルコメア収縮を制御します。Ca2+が結合すると、トロポニンCが立体構造変化を引き起こし、トロポミオシンによる抑制を解除することで、横紋筋における興奮–収縮連関シグナルを力発生へと結び付けます。TNNC1の働きは、筋原線維の組み立て、筋のエネルギー代謝、メカノトランスダクションを形作るカルシウム恒常性および収縮装置関連の経路と交差します。TNNC1の発現や機能の破綻は遺伝性心筋症や収縮表現型に関与するとされ、サルコメア生物学や心疾患機序の研究における標的として有用性を支持します。

Troponin C CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TNNC1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Troponin C CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TNNC1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTNNC1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Troponin Cの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTNNC1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTroponin C依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTNNC1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTroponin C経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。