Plasmide CRISPR d'Activation (h) TROP-2: sc-402046-ACT

TACSTD2 code l’antigène de surface des cellules trophoblastiques humaines TROP-2, une glycoprotéine transmembranaire de type I impliquée dans les interactions cellule–cellule et la signalisation épithéliale. TROP-2 module la signalisation intracellulaire du Ca²⁺ et s’interface avec des voies de prolifération et de survie, notamment MAPK/ERK et PI3K/AKT, influençant les programmes d’adhésion, de migration et de différenciation. Une expression dérégulée de TACSTD2 est fréquemment observée dans les cancers épithéliaux et est associée à des modifications du comportement invasif et à l’hétérogénéité tumorale, ce qui en fait un marqueur utile dans les études de biologie épithéliale. Par ailleurs, des variants de perte de fonction de TACSTD2 sont liés à des défauts de l’épithélium cornéen, ce qui étaye son rôle dans l’intégrité tissulaire et le maintien de la fonction barrière.

TROP-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TACSTD2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TROP-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TACSTD2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TACSTD2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TROP-2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TACSTD2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TROP-2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TROP-2 dans les cellules tumorales présentant une expression de TACSTD2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.