Partículas Lentivirales de Activación (h) TrkB: sc-400142-LAC

NTRK2 codifica la tirosina quinasa receptora TrkB, un receptor de neurotrofinas de alta afinidad para BDNF y NT-4/5 que regula la supervivencia neuronal, la diferenciación, la plasticidad sináptica y la remodelación de circuitos dependiente de la actividad. Tras la unión del ligando, TrkB activa las cascadas de señalización canónicas PI3K–AKT, RAS–MAPK/ERK y PLCγ–Ca2+, coordinando programas transcripcionales y la dinámica del citoesqueleto que moldean el crecimiento de neuritas y la función sináptica. La desregulación de la señalización de NTRK2/TrkB se ha vinculado con alteraciones del neurodesarrollo y fenotipos neuropsiquiátricos, y la actividad o expresión aberrante del receptor se ha estudiado en cánceres con implicación de la vía de las neurotrofinas. Como nodo que integra señales extracelulares de neurotrofinas con señalización intracelular mediada por quinasas, TrkB se utiliza ampliamente para estudiar el crosstalk entre vías, la conectividad neuronal y las salidas de señalización específicas del contexto en modelos celulares humanos.

Las partículas de activación lentiviral TrkB (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de NTRK2 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral TrkB (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción NTRK2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de TrkB. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo NTRK2 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.