Tris Acetate-EDTA buffer

Tris-Acetat-EDTA-Puffer (TAE) ist ein grundlegendes Reagenz in der molekularbiologischen Forschung, das vor allem in der Nukleinsäureelektrophorese und der DNA/RNA-Gelanalyse verwendet wird. Dieser Puffer wird sorgfältig formuliert, um optimale Bedingungen für die Trennung und Sichtbarmachung von Nukleinsäurefragmenten je nach Größe zu schaffen. Die Zusammensetzung des TAE-Puffers umfasst in der Regel drei Hauptkomponenten: Tris(hydroxymethyl)aminomethan (Tris), Essigsäure (Acetat) und Ethylendiamintetraessigsäure (EDTA). Tris dient als Puffer, der einen stabilen pH-Wert um 8,0 aufrechterhält, was der Stabilität von DNA und RNA und der Elektrophorese förderlich ist. Essigsäure wirkt als Gegenion und verleiht der Pufferlösung Leitfähigkeit. EDTA chelatiert zweiwertige Kationen wie Magnesiumionen, die andernfalls unspezifische Wechselwirkungen mit Nukleinsäuren fördern oder Nukleinsäuren durch Nukleasen abbauen könnten. In der Forschung wird TAE-Puffer üblicherweise in der Agarosegelelektrophorese verwendet, um DNA-Fragmente zu trennen, die durch Restriktionsenzymverdau, Polymerasekettenreaktion (PCR) oder andere Nukleinsäuremanipulationstechniken entstanden sind. Die Pufferkapazität und die Ionenstärke des Puffers ermöglichen eine effiziente Wanderung der Nukleinsäurefragmente durch die Gelmatrix unter dem Einfluss eines elektrischen Feldes. Nach der Elektrophorese können die DNA- oder RNA-Banden mit Fluoreszenzfarbstoffen, Ethidiumbromid oder anderen Nukleinsäurefärbemitteln sichtbar gemacht werden. Darüber hinaus ist der TAE-Puffer für Nukleinsäure-Reinigungstechniken wie die Gelextraktion unerlässlich, bei der er zur Solubilisierung von DNA- oder RNA-Fragmenten aus Agarosegelen für nachfolgende Anwendungen verwendet wird. Laufende Forschungsarbeiten konzentrieren sich auf die Optimierung von TAE-Pufferformulierungen für spezifische Anwendungen und die Erforschung seiner Kompatibilität mit neuen Nukleinsäure-Analysetechniken wie der Sequenzierung der nächsten Generation und der digitalen PCR.