TRIP12 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420729

Übersicht

Trip12 kodiert TRIP12, eine HECT‑Typ‑E3‑Ubiquitin‑Ligase, die den Transfer von Ubiquitin katalysiert und dadurch Proteinabbau sowie die Stärke von Signalwegen reguliert. In Mauszellen trägt TRIP12 zur ubiquitinabhängigen Proteostase bei und beeinflusst Prozesse wie DNA‑Schadensantworten, transkriptionelle Regulation und Zellzykluskontrolle, indem es die Stabilität zentraler regulatorischer Faktoren mitbestimmt. Als Bestandteil des Ubiquitin‑Proteasom‑Systems kann TRIP12‑vermittelte Ubiquitinierung die Anpassung an Stress und die Aufrechterhaltung der genomischen Integrität beeinflussen. Eine veränderte Aktivität von Ubiquitin‑Ligasen ist häufig mit fehlreguliertem Wachstum und neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen verknüpft, was Trip12 zu einem relevanten Ziel für mechanistische Studien der zellulären Homöostase und krankheitsassoziierter Signalwege macht.

Das TRIP12 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Trip12-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Trip12-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Trip12 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TRIP12-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Trip12-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TRIP12-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Trip12-Exone abzielen, die für die TRIP12-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Trip12-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TRIP12 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom TRIP12 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Trip12-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TRIP12 HDR-Plasmid (m) und TRIP12 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Trip12-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Trip12-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.