Trio CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401231-ACT

Das humane Gen **TRIO** kodiert Trio, einen multidomänigen Rho-Guanin-Nukleotid-Austauschfaktor (GEF), der Rho-Familien-GTPasen einschließlich **RAC1** und **RHOA** aktiviert, um den Umbau des Aktin-Zytoskeletts, die Zellpolarität, Adhäsion und gerichtete Migration zu koordinieren. Über seine GEF- und Scaffold-Funktionen integriert Trio Signale von Rezeptor-Tyrosinkinasen, Leit-/Guidance-Signalen und Integrin-Signalwegen und prägt dadurch Neuritenauswuchs, Synapsenentwicklung und Vesikeltransport. TRIO-abhängige Signalgebung moduliert MAPK- und PI3K-gekoppelte Prozesse und beeinflusst Transkriptionsprogramme downstream der Zytoskelettdynamik. Eine Fehlregulation der TRIO-Aktivität und eine veränderte Kontrolle von Rho-GTPasen wurden mit neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen sowie mit zellulären Verhaltensweisen in Verbindung gebracht, die für Tumorinvasion und metastatisches Potenzial relevant sind, was mechanistische Studien zu Zellmotilität und zur Bildung neuronaler Schaltkreise unterstützt.

Trio Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TRIO-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Trio Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TRIO-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TRIO-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Trio-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TRIO-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Trio-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Trio-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TRIO-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.