TRIM69 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404906

Panoramica

TRIM69 codifica una ligasi E3 dell’ubiquitina della famiglia “tripartite motif” (TRIM), caratterizzata da domini RING, B-box e coiled-coil che mediano interazioni proteina–proteina e segnalazione dipendente dall’ubiquitina. TRIM69 è stata implicata nella regolazione dell’immunità innata, inclusa la modulazione delle vie stimolate dall’interferone e dei meccanismi di restrizione antivirale, attraverso il controllo della stabilità dei substrati e delle risposte trascrizionali a valle. Influenzando l’ubiquitinazione e la proteostasi, TRIM69 può plasmare le risposte cellulari allo stress e le reti di segnalazione che intersecano i programmi infiammatori. Un’attività alterata della famiglia TRIM è ampiamente rilevante per la disregolazione immunitaria e la segnalazione oncogenica, rendendo TRIM69 un bersaglio utile per studi meccanicistici in questi contesti.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TRIM69 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TRIM69 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TRIM69 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TRIM69 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TRIM69.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TRIM69 per lo studio della segnalazione di TRIM69, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TRIM69 critici per la funzione di TRIM69
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TRIM69 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TRIM69 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal TRIM69 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TRIM69. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TRIM69 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR TRIM69 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TRIM69 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TRIM69 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.