TRIM29 Lentiviral Activation Particles (h): sc-402144-LAC

TRIM29 (Tripartite-Motif-enthaltendes Protein 29) kodiert ein TRIM-Familienprotein, das mit E3-Ubiquitin-Ligasen assoziiert ist und an der Regulation der Proteinstabilität, zellulären Stressantworten sowie epithelialen Differenzierungsprogrammen beteiligt ist. TRIM29 greift in Signalwege der DNA-Schadensantwort und chromatinassoziierte Prozesse ein und beeinflusst dadurch – kontextabhängig – die Transkriptionsregulation und Zellschicksalsentscheidungen. Eine veränderte TRIM29-Expression wurde bei zahlreichen Krebsarten beschrieben und wird im Hinblick auf Tumorprogression, Invasion und Mechanismen des Therapieansprechens sowie auf die allgemeine epitheliale Homöostase untersucht. Diese Eigenschaften machen TRIM29 zu einem nützlichen Ziel, um ubiquitinvermittelte Regulationsmechanismen, Signalwege zur Aufrechterhaltung der Genomintegrität und onkogene Signalnetzwerke in humanen Zellmodellen zu analysieren.

TRIM29 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente TRIM29-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

TRIM29 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der TRIM29-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen TRIM29-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen TRIM29-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.