TRF2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401289-ACT

Human TERF2 kodiert den telomerischen Repeat-Bindungsfaktor 2 (TRF2), eine zentrale Komponente des Shelterin-Komplexes, die an doppelsträngige telomerische DNA bindet, die Bildung von T-Loops fördert und Chromosomenenden davor schützt, als DNA-Doppelstrangbrüche erkannt zu werden. TRF2 unterdrückt die ATM-abhängige DNA-Schadenssignalisierung und begrenzt End-zu-End-Chromosomenfusionen, indem es unangemessenes nicht-homologes End-Joining an Telomeren verhindert; dadurch unterstützt es die Genomstabilität und eine korrekte Zellzyklusprogression. Über seine Funktionen bei der Telomer-Kappung, der Replikation und der Homöostase der Telomerlänge trägt TERF2 dazu bei, die Telomerbiologie mit DNA-Reparatur- und Checkpoint-Signalwegen zu koordinieren. Eine Dysregulation von TRF2 wurde mit Phänotypen der Telomer-Dysfunktion in Verbindung gebracht und wird häufig im Kontext genomischer Instabilität untersucht, wie sie mit Alterungsprozessen und der Krebsbiologie assoziiert ist.

TRF2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TERF2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

TRF2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TERF2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TERF2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen TRF2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TERF2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von TRF2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des TRF2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TERF2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.