Plasmide CRISPR d'Activation (h) TRF2: sc-401289-ACT

Le gène humain **TERF2** code le facteur de liaison aux répétitions télomériques 2 (**TRF2**), un composant central du complexe shelterin qui se fixe à l’ADN télomérique double brin afin de favoriser la formation de la t-loop et de protéger les extrémités chromosomiques contre leur reconnaissance comme des cassures double brin de l’ADN. TRF2 réprime la signalisation des dommages à l’ADN dépendante d’ATM et limite les fusions chromosomiques bout à bout en empêchant la jonction d’extrémités non homologues inappropriée au niveau des télomères, contribuant ainsi à la stabilité du génome et à une progression correcte du cycle cellulaire. Par ses rôles dans le coiffage des télomères, la réplication et l’homéostasie de la longueur télomérique, TERF2 aide à coordonner la biologie des télomères avec les voies de réparation de l’ADN et de contrôle (checkpoints). Une dérégulation de TRF2 a été associée à des phénotypes de dysfonctionnement télomérique et est fréquemment étudiée dans des contextes d’instabilité génomique liés aux processus du vieillissement et à la biologie des cancers.

TRF2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TERF2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TRF2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TERF2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TERF2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TRF2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TERF2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TRF2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TRF2 dans les cellules tumorales présentant une expression de TERF2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.