TREX-1 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-423502-ACT

Trex1 codiert TREX-1, eine 3′→5′-DNA-Exonuklease, die zytosolische einzel- und doppelsträngige DNA abbaut, um eine unangemessene Aktivierung der angeborenen Immunerkennung zu verhindern. Durch die Begrenzung der Anreicherung endogener DNA-Spezies dämpft TREX-1 die cGAS–STING-Signalübertragung und nachgeschaltete Typ-I-Interferon-Programme und verknüpft so DNA-Replikationsstress und Genomintegrität mit entzündlichen transkriptionellen Outputs. In Mauszellen ist die Trex1-Aktivität zudem mit der Beseitigung von DNA verbunden, die aus endogenen Retroelementen und aberranten Replikationsintermediaten stammt, und beeinflusst dadurch die Expression interferon-stimulierter Gene sowie die Immunhomöostase. Eine Fehlregulation des TREX-1-vermittelten DNA-Metabolismus ist breit relevant für autoinflammatorische Phänotypen und interferonassoziierte Pathologien, was Trex1 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung der Nukleinsäure-Sensorik und steriler Entzündung macht.

TREX-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Trex1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

TREX-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Trex1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Trex1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen TREX-1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Trex1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von TREX-1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des TREX-1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Trex1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.