Plasmide Double Nickase (h) TREK-1: sc-402212-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) TREK-1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide TREK-1 Double Nickase (h) et le plasmide TREK-1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant KCNK2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: TREK-1 Antibody (F-6): sc-398449
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) TREK-1 | sc-402212-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) TREK-1 | sc-402212-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain KCNK2 code TREK-1 (K2P2.1), un canal potassique à deux domaines « pore » qui assure une conductance de fond au K+ et contribue à façonner le potentiel de membrane au repos ainsi que l’excitabilité cellulaire. L’activité de TREK-1 est régulée par la tension membranaire et par divers signaux, notamment des seconds messagers liés aux GPCR, des phospholipides et des kinases, reliant ainsi des indices mécaniques et métaboliques au flux ionique. Dans le système nerveux, il module la décharge neuronale, la transmission synaptique et les réponses aux variations d’osmolarité et de pH ; il est également exprimé dans d’autres tissus excitables et non excitables, où il influence la polarisation membranaire. Des altérations de la fonction de KCNK2/TREK-1 ont été associées à des phénotypes neurologiques et psychiatriques, et sont étudiées notamment dans des contextes tels que le traitement de la douleur, les circuits liés à l’humeur et les réponses au stress associé à l’ischémie.
TREK-1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus KCNK2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de KCNK2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de KCNK2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de KCNK2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.