TRB-3 Lentiviral Activation Particles (m): sc-432803-LAC

Maus-Trib3 kodiert TRB-3, eine katalytisch inaktive Pseudokinase, die als stressinduzierbares Gerüstprotein (Scaffold) fungiert und die intrazelluläre Signalübertragung moduliert. TRB-3 wird häufig über Protein-Protein-Interaktionen mit der Regulation des Insulin/IGF–PI3K–AKT-Signalwegs in Verbindung gebracht und beeinflusst dadurch nachgeschaltete Effekte auf den Glukosestoffwechsel, das Zellüberleben, Autophagie sowie Transkriptionsprogramme während ER-Stress und Nährstoffentzug. Zudem ist TRB-3 in Entzündungs- und Stressantwort-Netzwerke eingebunden, einschließlich ATF4/CHOP-gesteuerter Signalwege der Unfolded-Protein-Response, sowie in kontextabhängige MAPK- und NF-κB-Aktivität. Eine veränderte TRB-3-Expression wurde mit metabolischer Dysregulation, fibrose- und entzündungsassoziierten Prozessen sowie tumoradaptiven Stress-Phänotypen assoziiert, was Trib3 zu einem relevanten Ziel für mechanistische Studien in Modellen der kardiometabolischen und Krebsbiologie macht.

TRB-3 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Trib3-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

TRB-3 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Trib3-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen TRB-3-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Trib3-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.