TRAP230 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h2): sc-404820-KO-2

Panoramica

MED12 codifica TRAP230, un componente fondamentale del complesso Mediator che collega i fattori di trascrizione specifici di sequenza all’RNA polimerasi II e coordina l’inizio e l’allungamento della trascrizione. Attraverso una regolazione dipendente dal Mediator, TRAP230 influenza programmi genici dello sviluppo e vie di segnalazione tra cui Wnt/β-catenina, TGF-β e la trascrizione mediata dai recettori nucleari. L’alterazione di MED12 compromette il controllo trascrizionale associato alla cromatina, modificando l’identità cellulare e le reti trascrizionali legate alla proliferazione. Alterazioni genetiche di MED12 sono state associate a molteplici contesti rilevanti per la malattia, rendendolo un bersaglio utile per studiare i meccanismi di disregolazione trascrizionale nelle cellule umane.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TRAP230 (h2) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MED12 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MED12 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MED12 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TRAP230.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MED12 per lo studio della segnalazione di TRAP230, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni MED12 critici per la funzione di TRAP230
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MED12 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TRAP230 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal TRAP230 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MED12. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TRAP230 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR TRAP230 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MED12 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MED12 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.