TRAP100 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-417318

Descripción general

MED24 codifica TRAP100, una subunidad esencial del complejo Mediator que conecta factores de transcripción específicos de secuencia con la ARN polimerasa II para coordinar la comunicación promotor–potenciador (enhancer) y el inicio de la transcripción. TRAP100 contribuye a programas de regulación génica dependientes de señales, incluida la transcripción impulsada por receptores nucleares y un control más amplio asociado a la cromatina sobre la progresión del ciclo celular, la diferenciación y las respuestas al estrés. La alteración de subunidades de Mediator, incluida MED24, puede perturbar redes transcripcionales vinculadas a anomalías del desarrollo y a la reprogramación transcripcional oncogénica, lo que convierte a MED24 en un nodo útil para estudiar el control de la expresión génica a nivel de vías. Por lo tanto, la función de MED24/TRAP100 es relevante para investigaciones sobre la desregulación transcripcional en biología del cáncer y otras enfermedades impulsadas por circuitos de regulación génica alterados.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO TRAP100 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen MED24 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del MED24 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de MED24 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TRAP100.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en MED24 para la investigación de la señalización de TRAP100, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de MED24 críticos para la función de TRAP100
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de MED24 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido TRAP100 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido TRAP100 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus MED24. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TRAP100 (h) y el plásmido HDR TRAP100 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología MED24 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana MED24 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.