Plasmide CRISPR d'Activation (h) TRAP-1: sc-402963-ACT

Le gène humain **TGFBRAP1** code **TRAP-1**, un facteur accessoire impliqué dans la signalisation des récepteurs du **transforming growth factor-β (TGF-β)** ainsi que dans des processus de trafic intracellulaire qui influencent la maturation du récepteur, sa stabilité et la propagation des voies en aval. En modulant l’efficacité et le contexte des programmes transcriptionnels **dépendants de SMAD**, TRAP-1 peut affecter des issues cellulaires telles que le contrôle de la prolifération, la différenciation, le remodelage de la matrice extracellulaire et les interactions de signalisation liées au système immunitaire. Des perturbations de la dynamique de la voie TGF-β sont largement associées à la fibrose, à la reprogrammation de la signalisation liée au cancer et à la biologie des maladies inflammatoires, ce qui fait de TRAP-1 un nœud pertinent pour des études mécanistiques du réglage fin de la voie. L’expression et l’interrogation fonctionnelle de **TGFBRAP1** soutiennent la recherche sur l’architecture de la transduction du signal, les complexes associés aux récepteurs et les réponses transcriptionnelles dépendantes du contexte.

TRAP-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TGFBRAP1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TRAP-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TGFBRAP1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TGFBRAP1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TRAP-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TGFBRAP1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TRAP-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TRAP-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de TGFBRAP1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.