Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Transketolase Double Nickase Plasmid (m): sc-423410-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Transketolase Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Transketolase Double-Nickase-Plasmid (m) und Transketolase Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Tkt abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Transketolase: sc-390179
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Transketolase Double Nickase Plasmid (m) | sc-423410-NIC | 20 µg | $410.00 |
Das murine **Tkt**-Gen codiert die Transketolase, ein thiaminpyrophosphatabhängiges Enzym, das im nicht-oxidativen Zweig des Pentosephosphatwegs reversible Zwei-Kohlenstoff-Transferreaktionen katalysiert. Durch die Umwandlung von Zuckerphosphaten wie Xylulose-5-phosphat, Ribose-5-phosphat und Fructose-6-phosphat verknüpft die Transketolase die Nukleotidbiosynthese mit dem glykolytischen Fluss und unterstützt das zelluläre Redoxgleichgewicht indirekt durch die Koordination mit der Aktivität des oxidativen PPP. Die Tkt-Funktion ist daher relevant für den proliferativen Stoffwechsel, die Aufrechterhaltung NADPH-abhängiger antioxidativer Systeme sowie den anabolen Bedarf in sich schnell teilenden Zellen. Eine Fehlregulation von PPP-Enzymen, einschließlich der Transketolase, wurde mit einer veränderten metabolischen Homöostase und Phänotypen oxidativen Stresses in Verbindung gebracht, die in der Stoffwechsel- und neurodegenerationsbezogenen Forschung breit untersucht werden.
Transketolase Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Tkt-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Tkt abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Tkt-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Tkt-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.