TRAIL CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423498-KO-2

概要

Tnfsf10 は、マウスの TNF 関連アポトーシス誘導リガンド（TRAIL）をコードしており、プロテアーゼにより切断されて遊離し得る II 型膜タンパク質である。TRAIL はデスレセプターを介してシグナルを伝達し、FADD 依存的なカスパーゼ 8 の活性化を通じて外因性アポトーシスを開始する。アポトーシスシグナル伝達にとどまらず、TRAIL は状況依存的に NF-κB および MAPK 経路の出力を調節し、炎症性シグナル、細胞生存、免疫恒常性に影響を与える。マウスモデルでは、TRAIL の生物学的機能は、デスレセプターシグナルがサイトカインネットワークやストレス応答と交差する腫瘍免疫監視、自己免疫、組織障害に関する研究で、しばしば解析対象となっている。

TRAIL CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるTnfsf10遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Tnfsf10内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Tnfsf10のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TRAILタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TRAILシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Tnfsf10欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TRAILの機能に不可欠なTnfsf10エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Tnfsf10ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TRAIL CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびTRAIL CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Tnfsf10遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TRAIL HDRプラスミド（m）および TRAIL HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTnfsf10ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTnfsf10標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。