Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
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TRAF6 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423497
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- TRAF6 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico TRAF6, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: TRAF6 Anticuerpo (D-10): sc-8409
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
TRAF6 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-423497 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
El gen Traf6 de ratón codifica TRAF6, una ligasa E3 de ubiquitina y proteína adaptadora que integra la señalización aguas abajo de miembros de la superfamilia del receptor de TNF y de los receptores tipo Toll/IL‑1 para controlar las respuestas inmunitarias innata y adaptativa. TRAF6 cataliza eventos de ubiquitinación enlazada a K63 que promueven el ensamblaje de los complejos TAK1 e IKK, impulsando la señalización de NF‑κB y MAPK y programas transcripcionales que regulan la inflamación, la supervivencia celular y la diferenciación. También es un componente central de la señalización RANK/RANKL en la osteoclastogénesis y contribuye a la regulación de la autofagia mediante andamiaje dependiente de ubiquitina. La señalización desregulada de TRAF6 se ha implicado en patología inflamatoria, defectos de remodelación ósea y contextos de señalización oncogénica en los que destacan la activación de NF‑κB/MAPK y la reprogramación de la vía de la ubiquitina.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO TRAF6 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Traf6 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Traf6 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Traf6 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TRAF6.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Traf6 para la investigación de la señalización de TRAF6, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Traf6 críticos para la función de TRAF6
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Traf6 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido TRAF6 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido TRAF6 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Traf6. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TRAF6 (m) y el plásmido HDR TRAF6 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Traf6 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Traf6 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.