TPST-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423487

Übersicht

Tpst2 kodiert die Tyrosylprotein-Sulfotransferase 2 (TPST-2), ein im Golgi-Apparat lokalisiertes Enzym, das die posttranslationale O-Sulfatierung von Tyrosinresten in sezernierten und membranständigen Proteinen katalysiert, wobei PAPS als Sulfatdonor dient. Diese Modifikation prägt Protein-Protein-Interaktionen sowie die Rezeptor-Ligand-Erkennung und beeinflusst dadurch die Chemokinsignalgebung, die Leukozytenmigration und weitere Prozesse der extrazellulären Kommunikation. Die Aktivität von TPST-2 trägt zur korrekten Reifung und Funktion mehrerer Peptidhormone und Adhäsionsmoleküle bei und verknüpft die Tpst2-abhängige Sulfatierung mit der Immun- und endokrinen Homöostase. Eine Fehlregulation der Tyrosinsulfatierung wurde mit veränderter inflammatorischer Signalübertragung und reproduktiven Phänotypen in Verbindung gebracht, wodurch Tpst2 einen hilfreichen Ansatzpunkt darstellt, um sulfatierungsabhängige Signalnetzwerke in Mausmodellen zu untersuchen.

Das TPST-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Tpst2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Tpst2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Tpst2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TPST-2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Tpst2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TPST-2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Tpst2-Exone abzielen, die für die TPST-2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Tpst2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TPST-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom TPST-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Tpst2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TPST-2 HDR-Plasmid (m) und TPST-2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Tpst2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Tpst2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.