Plásmido CRISPR de Activación (h) TPH2: sc-402296-ACT

TPH2 (triptófano hidroxilasa 2) codifica la enzima neuronal limitante de la velocidad para la biosíntesis de serotonina (5‑hidroxitriptamina), catalizando la hidroxilación de L‑triptófano a 5‑hidroxi‑L‑triptófano en neuronas serotoninérgicas. Como determinante clave de la disponibilidad de serotonina, TPH2 influye en programas de neurotransmisión que modulan el estado de ánimo, la respuesta al estrés, la regulación del ciclo sueño‑vigilia, la nocicepción y la función autonómica. La alteración de la expresión de TPH2 o la variación genética se ha investigado en el contexto de fenotipos neuropsiquiátricos y del neurodesarrollo en los que se implica la señalización serotoninérgica, incluidos rasgos afectivos y relacionados con la ansiedad. En modelos celulares, la actividad de TPH2 se cruza con vías que controlan el metabolismo de monoaminas, la plasticidad sináptica y la regulación génica dependiente de la actividad.

TPH2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TPH2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TPH2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TPH2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TPH2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TPH2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TPH2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TPH2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TPH2 en células tumorales con expresión de TPH2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.