TPD52 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423477

Übersicht

Tpd52 kodiert das Tumorprotein D52 (TPD52), einen konservierten Regulator des Membrantransports und der Dynamik des sekretorischen Weges, der den Vesikeltransport, die Exozytose und die Verteilung von Zelloberflächenproteinen beeinflusst. In Mauszellen wurde die TPD52-Aktivität mit Prozessen in Verbindung gebracht, die Zellwachstum und -umbau unterstützen, darunter die Koordination intrazellulärer Membrankompartimente sowie Signalausgaben, die mit der Funktion epithelialer und immunologischer Zellen assoziiert sind. Eine dysregulierte TPD52-Expression wurde in mehreren krebsbezogenen Kontexten beschrieben, in denen veränderter Transport und veränderte Sekretion Proliferation, Migration und metabolische Anpassung beeinflussen können. Daher wird Tpd52 häufig in Modellen der Tumorbiologie und der Zellzustandsplastizität untersucht, um zu klären, wie Membrantransport mit onkogenen Signalprogrammen zusammenspielt.

Das TPD52 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Tpd52-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Tpd52-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Tpd52 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TPD52-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Tpd52-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TPD52-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Tpd52-Exone abzielen, die für die TPD52-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Tpd52-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TPD52 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom TPD52 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Tpd52-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TPD52 HDR-Plasmid (m) und TPD52 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Tpd52-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Tpd52-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.