TPCN2 Lentiviral Activation Particles (h): sc-402960-LAC

TPCN2 (Two-Pore Channel 2) kodiert einen endolysosomalen Kationenkanal, der den intrazellulären Ionenfluss reguliert und insbesondere eine zentrale Rolle in der NAADP-abhängigen Ca²⁺-Signalgebung aus sauren Organellen spielt. Durch die Steuerung der Endosom–Lysosom-Dynamik, des vesikulären Transports und der Erregbarkeit von Organellen beeinflusst TPCN2 nachgelagerte Prozesse wie Autophagie, Membranfusionsereignisse und Ca²⁺-abhängige Signalkaskaden. Unterschiede in der TPCN2-Aktivität wurden mit veränderter Pigmentierungsbiologie und metabolischen Phänotypen in Verbindung gebracht, und eine fehlregulierte endolysosomale Signalgebung unter Beteiligung von TPCN2 ist für Studien zur Neurodegeneration und zum Verhalten von Krebszellen relevant. Diese Eigenschaften machen TPCN2 zu einem nützlichen Ziel, um lysosomale Signalnetzwerke und Ca²⁺-regulierte zelluläre Antworten in humanen Modellsystemen zu untersuchen.

TPCN2 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente TPCN2-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

TPCN2 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der TPCN2-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen TPCN2-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen TPCN2-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.