TP53INP2 Lentiviral Activation Particles (h2): sc-405261-LAC-2

Das humane TP53INP2 (tumor protein p53 inducible nuclear protein 2; auch bekannt als DOR) kodiert einen stressresponsiven Regulator der Autophagie, der als Gerüst für die Rekrutierung von ATG-Proteinen dient und die Bildung sowie Reifung von Autophagosomen unterstützt. TP53INP2 ist an Nährstoffsensorik und transkriptionellen Programmen beteiligt, die mit der p53-Signalgebung und der durch mTOR gesteuerten Autophagie verknüpft sind, und beeinflusst dadurch Proteostase, mitochondriale Qualitätskontrolle und zelluläre Überlebensentscheidungen unter metabolischem Stress. Eine dysregulierte Expression oder Fehl-Lokalisierung von TP53INP2 wurde mit einem veränderten autophagischen Flux in Kontexten in Verbindung gebracht, die für die Krebsbiologie, Neurodegeneration und metabolische Erkrankungen relevant sind, wobei beeinträchtigte Abbau- und Clearance-Wege die genomische Stabilität und Entzündungsprozesse beeinflussen können. Das Gene Editing von TP53INP2 ermöglicht mechanistische Untersuchungen zur Architektur des Autophagie-Signalwegs, zur Epistase mit zentralen ATG-Faktoren sowie funktionelle Genomik-Screens, die Stresssignalgebung mit krankheitsrelevanten zellulären Phänotypen verknüpfen.

TP53INP2 Lentivirale Aktivierungspartikel (h2) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente TP53INP2-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

TP53INP2 Lentivirale Aktivierungspartikel (h2) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der TP53INP2-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen TP53INP2-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen TP53INP2-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.