Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
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Topo IIIβ Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423472
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Topo IIIβ O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico Topo IIIβ, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Topo IIIβ-1 Anticorpo (B-10): sc-137238
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Topo IIIβ Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-423472 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Top3b codifica a DNA topoisomerase III beta (Topo IIIβ), uma topoisomerase do tipo IA que resolve o stresse topológico e intermediários de recombinação durante a manutenção do genoma. Em células de rato, a Topo IIIβ está implicada na preservação da integridade dos ácidos nucleicos através de funções na reparação do DNA, em respostas ao stresse associado à replicação e na regulação do metabolismo do RNA, em consonância com a sua capacidade de atuar tanto sobre substratos de DNA como de RNA. Estas atividades cruzam-se com vias que controlam conflitos entre transcrição e replicação e a estabilidade do genoma impulsionada pela recombinação, processos que influenciam a homeostase celular. A perturbação do processamento de ácidos nucleicos dependente de Top3b tem sido associada a fenótipos de instabilidade genómica e é relevante para estudos de mecanismos ligados ao neurodesenvolvimento e ao cancro em sistemas modelo.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Topo IIIβ (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Top3b em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Top3b, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Top3b na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Topo IIIβ.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Top3b para a investigação da sinalização de Topo IIIβ, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Top3b críticos para a função Topo IIIβ
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Top3b para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo Topo IIIβ Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo Topo IIIβ Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Top3b. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo Topo IIIβ Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR Topo IIIβ (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Top3b para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Top3b definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.