Topo IIIα CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423471

Übersicht

Top3a kodiert die DNA-Topoisomerase III alpha (Topo IIIα), eine Topoisomerase vom Typ IA, die während Replikation und Reparatur topologischen Stress der DNA sowie Rekombinationszwischenprodukte auflöst. In Mauszellen wirkt Topo IIIα innerhalb des BTRR-Komplexes zusammen mit BLM, RMI1 und RMI2 und katalysiert die Auflösung doppelter Holliday-Junctions, wodurch Crossover-Ereignisse begrenzt und eine zuverlässige Genomerhaltung gefördert werden. Diese Aktivität verknüpft Topo IIIα mit der homologen Rekombination, der Stabilität von Replikationsgabeln und der Segregation von Schwesterchromatiden. Störungen TOP3A-assoziierter Prozesse stehen mit Phänotypen genomischer Instabilität in Zusammenhang, die für Studien zur Krebsbiologie, zu Entwicklungsdefekten und zu DNA-Reparaturerkrankungen in Säugersystemen relevant sind.

Das Topo IIIα CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Top3a-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Top3a-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Top3a nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Topo IIIα-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Top3a-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Topo IIIα-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Top3a-Exone abzielen, die für die Topo IIIα-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Top3a-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Topo IIIα CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Topo IIIα CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Top3a-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Topo IIIα HDR-Plasmid (m) und Topo IIIα HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Top3a-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Top3a-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.