Topo IIIα CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404439

Übersicht

TOP3A kodiert die humane DNA-Topoisomerase IIIα, eine Topoisomerase vom Typ IA, die einzelsträngige DNA-topologische Zwischenprodukte während der DNA-Replikation, Rekombination und Reparatur auflöst. Topo IIIα wirkt im BTRR-Komplex zusammen mit BLM, RMI1 und RMI2, um doppelte Holliday-Junctions zu entflechten, aberrante Crossover-Ereignisse zu unterdrücken und die Genomstabilität während der homologen Rekombination zu erhalten. Zudem unterstützt sie über die Zusammenarbeit mit organellspezifischen Replikations- und Reparaturfaktoren die mitochondriale DNA-Erhaltung und verknüpft TOP3A damit mit der Integrität des nukleären und mitochondrialen Genoms. Störungen in TOP3A-assoziierten Signalwegen sind für Phänotypen der Genominstabilität relevant und wurden mit erblichen Erkrankungen in Verbindung gebracht, die durch defekte DNA-Reparatur und eine erhöhte Empfindlichkeit gegenüber Replikationsstress gekennzeichnet sind.

Das Topo IIIα CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TOP3A-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TOP3A-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TOP3A nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Topo IIIα-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TOP3A-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Topo IIIα-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf TOP3A-Exone abzielen, die für die Topo IIIα-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere TOP3A-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Topo IIIα CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Topo IIIα CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TOP3A-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Topo IIIα HDR-Plasmid (h) und Topo IIIα HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TOP3A-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TOP3A-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.