TOM40 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400967-ACT

ヒトのTOMM40は、ミトコンドリア外膜トランスロカーゼ（TOM）複合体の中心となるβバレル型ポアであるTOM40をコードしており、核コードタンパク質のミトコンドリアへの輸入を担います。前駆体タンパク質の認識と外膜を介した移行を可能にすることで、TOM40はミトコンドリアのプロテオスタシス、酸化的リン酸化能、ならびに細胞代謝と協調したミトコンドリア生合成の調整を支えます。TOMM40の機能は、オルガネラへの効率的なタンパク質輸送を維持する役割を通じて、ミトコンドリア動態、ストレスシグナル、アポトーシスを制御する経路とも交差します。遺伝的多型やミトコンドリア輸入の破綻は、神経変性などミトコンドリア機能障害を特徴とする疾患と関連づけられており、TOMM40はミトコンドリア恒常性の機序研究における重要な結節点となっています。

TOM40 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TOMM40の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TOM40 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TOMM40 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTOMM40転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TOM40の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTOMM40遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTOM40依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTOMM40発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTOM40経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。