Tollip CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402638-ACT

ヒトのTOLLIPはToll様受容体（TLR）およびIL-1受容体ファミリーの下流における自然免疫シグナル伝達を調節する、エンドソーム局在のアダプタータンパク質であるToll-interacting protein（Tollip）をコードします。Tollipはユビキチン化されたカーゴに結合し、ユビキチン–プロテアソーム系およびエンドリソソーム輸送機構と連携することで、受容体のターンオーバー、シグナル強度、炎症関連遺伝子の発現に影響を与えます。TLR/IL-1R–NF-κBおよびMAPK経路の制御における役割を通じて、TOLLIPはサイトカイン産生や免疫寛容を形作る細胞の意思決定に寄与します。TOLLIP活性の破綻は炎症応答の変化と関連しており、感染生物学、慢性炎症、免疫介在性疾患の機序などの文脈で研究されています。

Tollip CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TOLLIPの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Tollip CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TOLLIP 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTOLLIP転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Tollipの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTOLLIP遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTollip依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTOLLIP発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTollip経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。