TOB1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402842-ACT

Humanes TOB1 kodiert ein antiproliferatives Mitglied der BTG/TOB-Familie, das Transkriptionsprogramme moduliert, welche die Zellzyklusprogression, Differenzierung und Apoptose steuern. TOB1 wirkt als kontextabhängiger transkriptioneller Koregulator und ist in Signalnetzwerke wie die TGF-β/SMAD- und MAPK-Signalwege eingebunden, wodurch es die Genexpression als Antwort auf extrazelluläre Signale mitprägt. Durch die Beeinflussung des mRNA-Umsatzes sowie von Transkriptions-Repressions-/Aktivierungskomplexen trägt TOB1 zu Aktivierungszuständen von Immunzellen und zur allgemeinen homöostatischen Kontrolle des Wachstums bei. Eine dysregulierte TOB1-Expression oder ein gestörtes Signalgleichgewicht wurde mit veränderter Lymphozytenfunktion und onkogenen Prozessen in Verbindung gebracht, was TOB1 als mechanistischen Knotenpunkt in der Krebsbiologie und immunologischen Forschung unterstützt.

TOB1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TOB1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

TOB1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TOB1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TOB1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen TOB1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TOB1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von TOB1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des TOB1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TOB1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.