TNP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423463

Übersicht

Tnp1 kodiert das Transition-Protein 1 (TNP1), ein basisches nukleäres Protein, das während der späten Spermatogenese exprimiert wird und in sich verlängernden Spermatiden Histone ersetzt, bevor es zur Einlagerung von Protaminen kommt. TNP1 fördert die Chromatinkondensation und Genomverpackung während der Spermiogenese und unterstützt damit die korrekte Formgebung des Zellkerns sowie die Reifung der Spermien. Eine Störung von Tnp1 beeinträchtigt den Übergang von Histonen zu Protaminen und kann in Mausmodellen zu einer abnormalen Spermienchromatinstruktur und zu Phänotypen mit verminderter männlicher Fertilität führen. Als keimzellrestriktiver Chromatinregulator wird TNP1 häufig in Signalwegen untersucht, die die epigenetische Reprogrammierung, DNA-Kompaktion und die Reproduktionsbiologie steuern.

Das TNP1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Tnp1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Tnp1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Tnp1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TNP1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Tnp1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TNP1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Tnp1-Exone abzielen, die für die TNP1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Tnp1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TNP1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom TNP1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Tnp1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TNP1 HDR-Plasmid (m) und TNP1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Tnp1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Tnp1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.