TNIK Lentiviral Activation Particles (h): sc-401523-LAC

Humanes TNIK (TRAF2- und NCK-interagierende Kinase) ist eine Serin/Threonin-Kinase, die Signale von kleinen GTPasen und Adapterproteinen integriert, um die Zytoskelettdynamik, den vesikulären Transport und transkriptionelle Programme zu regulieren. TNIK hat gut beschriebene Funktionen in der Wnt/β-Catenin-Signalgebung, einschließlich der Modulation der TCF/LEF-abhängigen Transkription, und trägt zu Signalwegen bei, die Zellpolarität, Migration und neuronale Entwicklung steuern. In immunologischen und epithelialen Kontexten kann TNIK über Protein-Protein-Interaktionen und seine Kinaseaktivität mit Stress- und Entzündungssignalnetzwerken verknüpft sein. Eine dysregulierte TNIK-Expression oder -Signalgebung wurde mit onkogenen Zuständen des Wnt-Signalwegs und neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen in Verbindung gebracht, was TNIK zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien zur Kontrolle von Signalwegen und zum Zellverhalten macht.

TNIK Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente TNIK-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

TNIK Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der TNIK-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen TNIK-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen TNIK-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.