Plasmide CRISPR d'Activation (h) TNF-R2: sc-400709-ACT

TNFRSF1B code le récepteur 2 du facteur de nécrose tumorale (TNF‑R2), un membre de la famille des récepteurs du TNF exprimé préférentiellement dans les lignées immunitaires et endothéliales, et activé par le TNF lié à la membrane. La signalisation via TNF‑R2 mobilise des adaptateurs TRAF pour moduler les voies NF‑κB canonique et non canonique, MAPK et PI3K/AKT, façonnant ainsi la survie cellulaire, la prolifération et les programmes de cytokines inflammatoires. Outre ses fonctions immunorégulatrices, TNF‑R2 influence le remodelage tissulaire et les réponses angiogéniques via un dialogue avec les réseaux d’apoptose et de réponse au stress. Une activité dérégulée de TNFRSF1B a été associée à des affections inflammatoires et auto-immunes, à des pathologies vasculaires et à la biologie du microenvironnement tumoral–immunitaire, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de l’homéostasie immunitaire et de l’inflammation chronique.

TNF-R2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TNFRSF1B sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TNF-R2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TNFRSF1B dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TNFRSF1B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TNF-R2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TNFRSF1B natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TNF-R2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TNF-R2 dans les cellules tumorales présentant une expression de TNFRSF1B silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.