Plasmide Double Nickase (m2) TNF-R1: sc-423442-NIC-2
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m2) TNF-R1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide TNF-R1 Double Nickase (m2) et le plasmide TNF-R1 Double Nickase (m22) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Tnfrsf1a. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: TNF-R1 Antibody (H-5): sc-8436
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m2) TNF-R1 | sc-423442-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Chez la souris, Tnfrsf1a code le récepteur 1 du facteur de nécrose tumorale (TNF‑R1), un récepteur du TNF exprimé de manière ubiquitaire qui se lie au TNF et déclenche une transduction du signal contrôlant l’inflammation, la survie cellulaire et la mort cellulaire programmée. Lors de la liaison du ligand, TNF‑R1 assemble des complexes de signalisation membranaires et cytosoliques qui régulent l’activation de NF‑κB et des MAPK, ainsi que l’apoptose dépendante des caspases et la nécroptose médiée par RIPK, reliant les signaux de l’immunité innée aux voies transcriptionnelles et aux voies de mort cellulaire. La dérégulation de la signalisation de TNF‑R1 est impliquée dans la physiopathologie inflammatoire et auto-immune, les processus neuro-inflammatoires et les réponses aux lésions tissulaires, faisant de Tnfrsf1a un nœud clé pour l’étude de l’homéostasie pilotée par les cytokines. L’édition du gène Tnfrsf1a dans des modèles murins permet une exploration mécanistique des réseaux de signalisation du TNF, de la fonction des domaines du récepteur et des contributions spécifiques à chaque type cellulaire aux phénotypes de maladies à médiation immunitaire.
TNF-R1 Le plasmide double nickase (m2) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Tnfrsf1a dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Tnfrsf1a. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Tnfrsf1a. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Tnfrsf1a.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.