Plasmide Double Nickase (m) TNF alpha: sc-423433-NIC

Le gène murin **Tnf** code le facteur de nécrose tumorale alpha (**TNFα**), une cytokine pro‑inflammatoire pléiotrope produite principalement par les macrophages activés, les lymphocytes T et d’autres populations de l’immunité innée. Le TNFα transmet ses signaux via **TNFR1** et **TNFR2** pour réguler les cascades **NF‑κB** et **MAPK**, contrôlant ainsi l’induction de cytokines, le recrutement des leucocytes, la survie cellulaire et les voies de mort cellulaire programmée, dont l’apoptose et la nécroptose. En tant que nœud central de la signalisation inflammatoire, le TNFα influence le remodelage tissulaire, l’activation vasculaire et l’homéostasie immunitaire, et il est largement étudié dans des contextes d’auto‑immunité, d’infection, d’inflammation métabolique et de neuroinflammation. Une activité **Tnf** dérégulée est associée à des phénotypes inflammatoires chroniques et à une altération du dialogue immunitaire inné–adaptatif dans des modèles murins de maladies.

TNF alpha Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Tnf dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Tnf. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Tnf. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Tnf.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.