TMIE CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423149

Übersicht

Mouse Tmie kodiert TMIE, ein kleines transmembranäres Protein, das als essenzieller Bestandteil der Mechanotransduktions-Maschinerie in Haarzellen des Innenohrs fungiert. TMIE ist an der Assemblierung und Stabilisierung des MET-Kanal-Komplexes an den Stereozilien beteiligt und unterstützt so die Umwandlung mechanischer Reize in Rezeptorpotenziale, die die auditive Signalübertragung antreiben. Eine Störung von TMIE beeinträchtigt die Funktion des Haarbündels, verändert den Ionenfluss und die Membranerregbarkeit und kompromittiert sensorische Transduktionswege, die für Hören und Gleichgewicht erforderlich sind. Genetische Defekte in TMIE/Tmie sind mit erblichen Taubheits-Phänotypen verknüpft, was TMIE zu einem relevanten Ziel für die Untersuchung der Cochlea-Entwicklung, der Haarzell-Physiologie und der Funktion sensorischer neuronaler Schaltkreise in Mausmodellen macht.

Das TMIE CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Tmie-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Tmie-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Tmie nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TMIE-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Tmie-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TMIE-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Tmie-Exone abzielen, die für die TMIE-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Tmie-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TMIE CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom TMIE CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Tmie-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TMIE HDR-Plasmid (m) und TMIE HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Tmie-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Tmie-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.