Plasmide Double Nickase (m) TMEM38A: sc-428763-NIC

Tmem38a code TMEM38A, une protéine membranaire du réticulum endoplasmique impliquée dans l’homéostasie ionique intracellulaire et le couplage excitation–contraction via la régulation de la dynamique de libération du calcium. Chez la souris, TMEM38A est associée à la physiologie du muscle squelettique et contribue à des processus qui façonnent la gestion du calcium par le RE, l’excitabilité membranaire et les voies de signalisation en aval sensibles aux flux de calcium. Une perturbation de l’activité de TMEM38A peut modifier des programmes transcriptionnels dépendants du calcium ainsi que des réponses au stress, influençant la fonction des fibres musculaires et l’adaptation métabolique. Ces caractéristiques font de TMEM38A une cible pertinente pour étudier les mécanismes à l’origine des performances musculaires, des phénotypes associés aux myopathies et, plus largement, des troubles liés à une signalisation calcique perturbée.

TMEM38A Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Tmem38a dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Tmem38a. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Tmem38a. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Tmem38a.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.