Plasmide CRISPR d'Activation (h) TMEM173: sc-403148-ACT

TMEM173 code STING, une protéine adaptatrice résidente du réticulum endoplasmique qui détecte l’ADN cytosolique via des dinucléotides cycliques générés par cGAS et déclenche la signalisation de l’immunité innée. Lors de son activation, STING se relocalise vers l’appareil de Golgi et favorise, via TBK1 et IKK, la phosphorylation d’IRF3 et de NF-κB, ce qui induit des programmes transcriptionnels conduisant à la production d’interférons de type I et de cytokines inflammatoires. Cette voie intègre les réponses aux dommages de l’ADN, la défense antimicrobienne et la mort cellulaire immunogène, et elle est strictement régulée afin d’éviter une inflammation aberrante. Une activité de STING dérégulée a été associée à des phénotypes auto-inflammatoires, à des interféronopathies et à une modulation des interactions tumeur–système immunitaire, faisant de TMEM173 un nœud central de la recherche en immunologie et en biologie du cancer.

TMEM173 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TMEM173 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TMEM173 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TMEM173 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TMEM173, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TMEM173. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TMEM173 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TMEM173 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TMEM173 dans les cellules tumorales présentant une expression de TMEM173 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.