Plasmide CRISPR/Cas9 KO TMEM132B (h): sc-414044

Présentation

TMEM132B code une protéine transmembranaire à passage unique de la famille TMEM132, enrichie dans le système nerveux et associée à l’organisation membranaire ainsi qu’aux interactions cellule–cellule et cellule–MEC (matrice extracellulaire). Des travaux récents impliquent les protéines TMEM132 dans le couplage au cytosquelette et des processus liés à l’adhérence, qui influencent la croissance des neurites, la connectivité synaptique et la morphologie cellulaire. L’expression de TMEM132B et ses variations génétiques ont été étudiées dans des contextes neurodéveloppementaux et neuropsychiatriques, ce qui soutient sa pertinence pour l’exploration des voies qui façonnent la formation et le maintien des réseaux neuronaux. L’étude fonctionnelle de TMEM132B peut aider à préciser comment l’échafaudage transmembranaire s’interface avec des modules de signalisation régissant la différenciation neuronale et le remodelage en réponse au stress.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TMEM132B (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TMEM132B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TMEM132B, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TMEM132B à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TMEM132B.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TMEM132B pour l'étude de la signalisation de TMEM132B, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TMEM132B essentiels à la fonction de TMEM132B
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TMEM132B pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TMEM132B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le TMEM132B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TMEM132B. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TMEM132B plasmide HDR (h) et le TMEM132B (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TMEM132B pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TMEM132B définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.