TMB Substrate Buffer, 1X

TMB (3,3',5,5'-Tetramethylbenzidin)-Substratpuffer, in der Regel als gebrauchsfertige 1X-Lösung, wird häufig in biochemischen Tests eingesetzt, insbesondere in enzymatischen Immunoassays (ELISAs). Die Hauptfunktion von TMB in diesen Tests ist die eines chromogenen Substrats für das Enzym Meerrettichperoxidase (HRP), das in diesen Tests häufig mit Antikörpern konjugiert wird. Der Wirkungsmechanismus des TMB-Substratpuffers beinhaltet die enzymatische Umwandlung von TMB durch HRP in ein farbiges Produkt. Ursprünglich ist TMB farblos, aber bei der Oxidation durch HRP in Gegenwart von Wasserstoffperoxid (H₂O₂) wandelt es sich in eine blaue oxidierte Form um. Die Intensität der entstehenden blauen Farbe ist direkt proportional zur Menge des vorhandenen Enzyms und folglich zur Menge des Zielantigens im Assay. Diese kolorimetrische Veränderung ist durch Spektrophotometrie quantifizierbar, typischerweise bei einer Wellenlänge von 650 nm für die blaue Form. Zur Erhöhung der Empfindlichkeit kann die Reaktion mit einer Säure, z. B. Schwefel- oder Salzsäure, gestoppt werden, wodurch sich die blaue Farbe nach gelb verschiebt, messbar bei 450 nm. Diese Verschiebung verstärkt nicht nur das Signal, sondern stabilisiert es auch, so dass genauere Messwerte möglich sind. In der Forschung wird der TMB-Substratpuffer wegen seiner hohen Empfindlichkeit und Spezifität geschätzt. Er ermöglicht den Nachweis und die Quantifizierung verschiedener biologischer Moleküle, einschließlich Hormonen, Proteinen und Antikörpern, und ist damit unverzichtbar in der diagnostischen Forschung, der quantitativen und qualitativen Analyse von Biomarkern und verschiedenen anderen Anwendungen, bei denen eine präzise Messung biologischer Wechselwirkungen erforderlich ist. Die gebrauchsfertige Formulierung des 1X TMB-Substratpuffers vereinfacht das Assay-Setup und gewährleistet Konsistenz und Zuverlässigkeit bei allen Experimenten.