Plasmide CRISPR d'Activation (h) TM6SF2: sc-408066-ACT

TM6SF2 (transmembrane 6 superfamily member 2) humain code une protéine membranaire multipasse associée au réticulum endoplasmique, impliquée dans la gestion des lipides hépatiques et la sécrétion des lipoprotéines de très faible densité (VLDL). TM6SF2 module l’assemblage des lipoprotéines riches en triglycérides et influence l’accumulation intracellulaire de triglycérides, ce qui la relie aux voies métaboliques qui régissent la dynamique des gouttelettes lipidiques et l’homéostasie du RE. Des variations génétiques et des modifications d’expression de TM6SF2 ont été associées à la dyslipidémie et à une susceptibilité accrue aux phénotypes de stéatose hépatique, ce qui confirme sa pertinence dans les études des maladies hépatiques métaboliques. En tant que nœud régulateur des flux lipidiques dans les hépatocytes, TM6SF2 est fréquemment étudiée dans des contextes allant du métabolisme lipidique aux réponses au stress liées à l’inflammation, ainsi qu’aux mécanismes de risque cardiométabolique.

TM6SF2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TM6SF2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TM6SF2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TM6SF2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TM6SF2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TM6SF2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TM6SF2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TM6SF2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TM6SF2 dans les cellules tumorales présentant une expression de TM6SF2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.