Plásmido CRISPR de Activación (h) TLR9: sc-400600-ACT

TLR9 codifica el receptor tipo Toll 9, un receptor endosomal de reconocimiento de patrones que detecta motivos CpG no metilados en el ADN microbiano y mitocondrial para iniciar la señalización inmunitaria innata. Tras la unión del ligando, TLR9 señaliza principalmente a través de MYD88 para activar cascadas dependientes de IRAK/TRAF6 que convergen en programas transcripcionales de NF-κB e IRF, promoviendo respuestas de citocinas inflamatorias e interferón de tipo I. Esta vía modula la maduración de las células dendríticas, la activación de los linfocitos B y la defensa antimicrobiana, y su desregulación se ha implicado en inflamación crónica y en la activación inmunitaria asociada a autoinmunidad. Por ello, el TLR9 humano se estudia ampliamente en el contexto del reconocimiento de ácidos nucleicos, el tráfico endosomal y las redes de interacción entre PRR relevantes para la homeostasis inmunitaria.

TLR9 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TLR9 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TLR9 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TLR9 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TLR9, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TLR9. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TLR9 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TLR9 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TLR9 en células tumorales con expresión de TLR9 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.