TLE1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423412

Übersicht

Tle1 kodiert den transkriptionellen Korepressor TLE1 (Transducin-Like Enhancer of split 1), ein Mitglied der Groucho/TLE-Familie, das die Genexpression moduliert, indem es an DNA-assoziierte Transkriptionsfaktoren bindet und chromatinregulierende Komplexe rekrutiert. In Mauszellen ist TLE1 ein zentraler Effektor von Notch- und Wnt/β-Catenin-abhängigen Transkriptionsprogrammen und trägt durch die Repression von Zielpromotoren und -Enhancern zur Linienfestlegung, neuronalen Entwicklung und Aufrechterhaltung der zellulären Identität bei. Durch die Integration von Signalen aus Entwicklungswegen beeinflusst TLE1 Zellschicksalsentscheidungen, den Zeitpunkt der Differenzierung und kontextabhängige Proliferation. Eine veränderte, mit TLE1 verknüpfte transkriptionelle Kontrolle wird in Modellen der Entwicklungsfehlregulation und onkogenen Signalgebung untersucht, in denen das Gleichgewicht der Wnt-/Notch-Signalwege und die epigenetische Repression gestört sind.

Das TLE1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Tle1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Tle1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Tle1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TLE1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Tle1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TLE1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Tle1-Exone abzielen, die für die TLE1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Tle1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TLE1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom TLE1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Tle1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TLE1 HDR-Plasmid (m) und TLE1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Tle1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Tle1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.