TINAGL1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-416499-ACT

TINAGL1 (tubulointerstitial nephritis antigen-like 1) kodiert ein sezerniertes, mit der extrazellulären Matrix assoziiertes Glykoprotein, das an Zell–Matrix-Adhäsion und am Remodeling der perizellulären Umgebung beteiligt ist. Es wird mit der Regulation zellulärer Verhaltensweisen wie Migration, Adhäsion und Überleben in Verbindung gebracht – Prozesse, die mit integrinvermittelter Signalübertragung und der Organisation der extrazellulären Matrix zusammenhängen. In menschlichen Geweben und Modellsystemen wurde eine veränderte TINAGL1-Expression mit Veränderungen der epithelial–mesenchymalen Plastizität und invasiven Phänotypen assoziiert, was seine Relevanz für Studien zur Tumorprogression und zum metastatischen Potenzial unterstreicht. Als matrizellulärer Faktor bietet TINAGL1 einen nützlichen Ansatzpunkt, um zu untersuchen, wie extrazelluläre Signale Signalnetzwerke und mikroenvironmentabhängige Zellzustände prägen.

TINAGL1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TINAGL1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

TINAGL1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TINAGL1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TINAGL1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen TINAGL1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TINAGL1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von TINAGL1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des TINAGL1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TINAGL1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.