TIMP-4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402560

Übersicht

TIMP4 kodiert den Tissue Inhibitor of Metalloproteinasen 4 (TIMP-4), einen sezernierten endogenen Inhibitor, der Matrix-Metalloproteinasen bindet und hemmt, um den Umsatz der extrazellulären Matrix (ECM) zu regulieren. Durch die Modulation der perizellulären Proteolyse beeinflusst TIMP-4 Zelladhäsion, Migration und Programme des Gewebeumbaus, die mit der ECM–Integrin-Signalgebung, entzündlichen Signalen und der Verfügbarkeit von Wachstumsfaktoren verknüpft sind. Eine veränderte TIMP4-Expression oder ein verschobenes TIMP/MMP-Gleichgewicht wird häufig in Kontexten wie Fibrose, vaskulärem Remodeling und der Dynamik des Tumormikromilieus untersucht, in denen ECM-Zusammensetzung und Proteaseaktivität zelluläre Phänotypen prägen. TIMP-4 ist außerdem an der Kontrolle der proteaseabhängigen Prozessierung bioaktiver Moleküle beteiligt und ist damit relevant für die Zuordnung von Signalwegen in der Matrixbiologie und der Proteostase.

Das TIMP-4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TIMP4-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TIMP4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TIMP4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TIMP-4-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TIMP4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TIMP-4-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf TIMP4-Exone abzielen, die für die TIMP-4-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere TIMP4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TIMP-4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom TIMP-4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TIMP4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TIMP-4 HDR-Plasmid (h) und TIMP-4 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TIMP4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TIMP4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.