Plasmide Double Nickase (h) TIMP-3: sc-401255-NIC

TIMP3 code l’inhibiteur tissulaire des métalloprotéinases 3 (TIMP‑3), un inhibiteur lié à la matrice extracellulaire de multiples MMP et protéases ADAM/ADAMTS, qui limite la protéolyse péricellulaire et stabilise l’architecture de la matrice. En modulant le clivage (shedding) de récepteurs et de ligands de surface, TIMP‑3 influence les voies de signalisation de l’EGFR et du TNF, la migration cellulaire, l’angiogenèse et les réponses inflammatoires au sein des microenvironnements tissulaires. Son activité est étroitement liée aux programmes de remodelage de la matrice extracellulaire qui façonnent la fibrose, l’homéostasie vasculaire et les interactions tumeur–stroma. Une expression ou une fonction altérée de TIMP3 a été associée à une dérégulation du renouvellement de la matrice et à des pathologies telles que le remodelage cardiovasculaire, l’inflammation chronique et la progression tumorale.

TIMP-3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TIMP3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TIMP3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TIMP3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TIMP3.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.