TIMP-1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400408

Descripción general

TIMP1 codifica el inhibidor tisular de las metaloproteinasas-1 (TIMP-1), una glucoproteína secretada que se une a las metaloproteinasas de la matriz y las inhibe para regular el recambio de la matriz extracelular y la señalización proteolítica. Al restringir la actividad de las MMP, TIMP-1 influye en las interacciones célula–matriz, la remodelación tisular y las respuestas inflamatorias, con efectos posteriores sobre la migración, la invasión y los programas de remodelación impulsados por citocinas. TIMP-1 también está implicado en señalización independiente de MMP a través de interacciones con la superficie celular que pueden modular, de manera dependiente del contexto, vías de supervivencia y proliferación. La expresión alterada de TIMP1 y el equilibrio TIMP-1/MMP se estudian con frecuencia en fibrosis, artritis, remodelación cardiovascular y biología del cáncer, donde la dinámica desregulada de la matriz contribuye a fenotipos asociados a la enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO TIMP-1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen TIMP1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del TIMP1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de TIMP1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TIMP-1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en TIMP1 para la investigación de la señalización de TIMP-1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de TIMP1 críticos para la función de TIMP-1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de TIMP1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido TIMP-1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido TIMP-1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus TIMP1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TIMP-1 (h) y el plásmido HDR TIMP-1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología TIMP1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana TIMP1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.