TIM-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-431363

Übersicht

Havcr2 kodiert den immunregulatorischen Rezeptor TIM-3, ein Typ-I-Membranprotein, das in mehreren Immunzelllinien exprimiert wird, darunter aktivierte T-Zellen, regulatorische T-Zellen, dendritische Zellen und angeborene Immunzellsubtypen. TIM-3 integriert Signale, die Aktivierungsschwellen, Toleranz und die Effektor-Differenzierung von T-Zellen prägen, und beeinflusst im Kontext der Antigenstimulation die Zytokinproduktion sowie die Funktion der immunologischen Synapse. Über Interaktionen mit Liganden wie Galectin-9 und Phosphatidylserin trägt TIM-3 zu Signalwegen bei, die mit T‑Zell-Dysfunktion und chronischer Antigenexposition assoziiert sind, und wird damit mit Erschöpfungsprogrammen des Immunsystems sowie der Modulation entzündlicher Regelkreise in Verbindung gebracht. In Mausmodellen wird die Biologie von Havcr2/TIM-3 umfassend in Kontexten wie Autoimmunität, chronischen Infektionen und der Tumorimmunologie untersucht, um Immunhomöostase und gewebespezifische Entzündungen besser zu verstehen.

Das TIM-3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Havcr2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Havcr2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Havcr2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TIM-3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Havcr2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TIM-3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Havcr2-Exone abzielen, die für die TIM-3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Havcr2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TIM-3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom TIM-3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Havcr2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TIM-3 HDR-Plasmid (m) und TIM-3 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Havcr2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Havcr2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.