TIM-3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-431363

Descripción general

Havcr2 codifica el receptor inmunorregulador TIM-3, una proteína de membrana tipo I expresada en múltiples linajes inmunitarios, incluidas las células T activadas, las células T reguladoras, las células dendríticas y subpoblaciones de la inmunidad innata. TIM-3 integra señales que determinan los umbrales de activación de las células T, la tolerancia y la diferenciación efectora, e influye en la producción de citocinas y en la función de la sinapsis inmunológica en el contexto de la estimulación antigénica. Mediante interacciones con ligandos como la galectina-9 y la fosfatidilserina, TIM-3 contribuye a vías asociadas con la disfunción de las células T y la exposición crónica a antígeno, lo que lo vincula con programas de agotamiento inmunitario y con la modulación de circuitos inflamatorios. En modelos murinos, la biología de Havcr2/TIM-3 se estudia ampliamente en contextos de autoinmunidad, infección crónica e inmunología tumoral para comprender la homeostasis inmunitaria y la inflamación específica de tejidos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO TIM-3 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Havcr2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Havcr2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Havcr2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TIM-3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Havcr2 para la investigación de la señalización de TIM-3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Havcr2 críticos para la función de TIM-3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Havcr2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido TIM-3 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido TIM-3 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Havcr2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TIM-3 (m) y el plásmido HDR TIM-3 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Havcr2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Havcr2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.