TIF1γ CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403230-ACT

TRIM33 (TIF1γ) kodiert einen Transkriptions-Koregulator mit Tripartite-Motif-Domäne, der chromatinassoziierte Ubiquitin-Ligase-Aktivität mit signalabhängiger Genregulation verknüpft. TIF1γ moduliert die SMAD-vermittelte TGF-β/BMP-Signalübertragung, beeinflusst die Transkriptionselongation und das Chromatin-Remodeling und ist über die Regulation nukleärer Proteinkomplexe an DNA-Schadensantworten beteiligt. Durch die Feinabstimmung linienspezifischer Transkriptionsprogramme und Zellschicksalsentscheidungen wird TRIM33 u. a. in Kontexten wie hämatopoetischer Differenzierung, epithelial-mesenchymaler Transition und Stress-Signalnetzwerken untersucht. Eine dysregulierte TRIM33-Funktion und eine veränderte Ausgabe des TGF-β-Signalwegs wurden mit Tumorbiologie und anderen Erkrankungen in Verbindung gebracht, die mit aberranter Transkriptionskontrolle einhergehen.

TIF1γ Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TRIM33-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

TIF1γ Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TRIM33-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TRIM33-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen TIF1γ-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TRIM33-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von TIF1γ-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des TIF1γ-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TRIM33-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.