Plásmido CRISPR de Activación (h) TIF1β: sc-401999-ACT

TRIM28, también conocido como TIF1β (KAP1), es un correpresor transcripcional asociado a KRAB que coordina el silenciamiento epigenético de genes mediante el reclutamiento de modificadores de la cromatina, como SETDB1 y el complejo NuRD/HDAC, para establecer heterocromatina marcada por H3K9me3. Desempeña funciones centrales en la regulación de elementos transponibles, la estabilidad genómica, las respuestas al daño del ADN y el mantenimiento de la identidad celular a través de un control amplio de los programas transcripcionales. La represión dependiente de TRIM28 se integra con vías que controlan la organización de la cromatina, la señalización mediada por ubiquitina y redes transcripcionales del desarrollo. La desregulación de la actividad de TRIM28/TIF1β se ha vinculado a estados de diferenciación alterados y a una represión transcripcional aberrante observada en múltiples contextos relevantes para la enfermedad, incluidos el remodelado epigenético oncogénico y fenotipos del neurodesarrollo.

TIF1β El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TRIM28 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TIF1β El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TRIM28 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TRIM28, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TIF1β. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TRIM28 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TIF1β en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TIF1β en células tumorales con expresión de TRIM28 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.